在細胞培養及相關(guān)衍生實(shí)驗中,顯微鏡是一個(gè)很重要的儀器。目前,市場(chǎng)上有各種類(lèi)型的顯微鏡,選擇一款符合需求又適用的顯微鏡是一個(gè)挑戰,下面為大家介紹倒置顯微鏡和熒光顯微鏡的原理,便于大家選擇。
倒置顯微鏡
倒置顯微鏡組成和普通顯微鏡一樣,主要包括三部分:機械部分、照明部分、光學(xué)部分。
倒置顯微鏡組成和普通正置顯微鏡一樣,只不過(guò)物鏡與照明系統顛倒,前者在載物臺之下,后者在載物臺之上。
這樣的構造使得照明聚光系統與載物臺的有效距離可以顯著(zhù)擴大,便于放置培養皿、細胞培養瓶等較厚的待觀(guān)察器具(當然載玻片等也可以),而同時(shí)物鏡與材料之間的工作距離不必很大。
倒置顯微鏡供醫療衛生單位、高等院校、研究所用于微生物、細胞、細菌、組織培養、懸浮體、沉淀物等的觀(guān)察,可連續觀(guān)察細胞、細菌等在培養液中繁殖分裂的過(guò)程,并可將此過(guò)程中的任一形態(tài)拍攝下來(lái)。
在細胞學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、遺傳工程學(xué)、工業(yè)微生物學(xué)、植物學(xué)等領(lǐng)域中應用廣泛。
倒置顯微鏡
熒光顯微鏡
熒光顯微鏡用于研究細胞內物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。
對被檢物體來(lái)說(shuō),熒光產(chǎn)生方式有兩種:自發(fā)熒光,經(jīng)過(guò)紫外照射直接發(fā)出熒光;繼發(fā)熒光,被觀(guān)察物體經(jīng)過(guò)熒光染料處理之后,經(jīng)過(guò)紫外光照射才能發(fā)出熒光。
細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線(xiàn)照射后產(chǎn)生自發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線(xiàn)照射亦可發(fā)出繼發(fā)熒光。
熒光顯微鏡利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源,經(jīng)過(guò)濾色系統發(fā)出一定波長(cháng)的光(紫外光365nm或紫藍光420nm)作為激發(fā)光、激發(fā)標本內的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過(guò)物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀(guān)察。
這樣在強烈的對襯背景下,即使熒光很微弱也易辨認,敏感性高,主要用于細胞結構和功能以及化學(xué)成分等的研究。
研究級熒光顯微鏡
熒光顯微鏡分為透射式和落射式兩類(lèi),前者較為原始,后者較為先進(jìn)。
兩類(lèi)熒光顯微鏡的基本構建相似,主要區別為:透射式的激發(fā)光透過(guò)標本,標本整體產(chǎn)生熒光,熒光再進(jìn)入物鏡,放大倍數越高,熒光越弱;落射式的激發(fā)光投射在標本表面,標本表面產(chǎn)生熒光,熒光再進(jìn)入物鏡,放大倍數越高,熒光越強,適于進(jìn)行高倍觀(guān)察。
熒光顯微鏡主要構件有汞燈光源、激發(fā)濾板、分色鏡(落射式)、壓制濾板、暗場(chǎng)聚光鏡(透射式)等。此外,由于汞燈發(fā)熱嚴重,大多還裝有吸熱濾鏡。
部分熒光顯微鏡還有相差物鏡和環(huán)狀光闌,因此可以進(jìn)行相差觀(guān)察。
還有的熒光顯微鏡采取倒置構架,又是倒置顯微鏡,等等。
倒置熒光顯微鏡
此外,上述顯微鏡都可以通過(guò)安裝CCD組裝成數碼顯微鏡,它是將顯微鏡看到的實(shí)物圖像通過(guò)數模轉換,使其成像在計算機上。
從而,我們可以對微觀(guān)領(lǐng)域的研究從傳統的普通的雙眼觀(guān)察到通過(guò)顯示器上再現,從而提高了工作效率。