(一)準備工作
1.在開(kāi)始工作以前，要清除生物安全柜內表面的污染。
2.將所有必需的物品置于安全柜內，以盡可能減少雙臂進(jìn)出前面開(kāi)口的次數。物品放置要注意以下幾點(diǎn)：
?、買(mǎi)I級生物安全柜臺面前面和后面的進(jìn)氣格柵不能被物品阻擋。
?、谒形锲窇M可能地放在工作臺后部靠近工作臺邊緣的位置，并使其在操作中不會(huì )阻擋后部格柵。
?、劭僧a(chǎn)生氣溶膠的設備(如：混勻器、離心機等)應靠近安全柜的后部放置。有生物危害性的廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤(pán)子等體積較大的物品，應該放在安全柜內的某一側。
?、軡崈舻奈锲窇胖迷诰嚯x產(chǎn)生氣溶膠器皿至少15cm外，降低交叉污染的可能性。
?、萑菀资茏贤饩€(xiàn)損傷的實(shí)驗樣本可以在紫外線(xiàn)殺菌后的實(shí)驗之前放入。
?、薏灰诠ぷ鲄^內排放過(guò)多的物品。
3.關(guān)閉操作前窗，打開(kāi)生物安全柜的紫外燈，對生物安全柜工作臺面，側壁表面以及后壁內側進(jìn)行殺菌處理。
4.稍微打開(kāi)操作前窗，讓生物安全柜工作區排氣幾分鐘之后再開(kāi)始工作。
(二)操作注意事項
1.在使用生物安全柜時(shí)應穿著(zhù)個(gè)體防護并戴手套防止被污染。在進(jìn)行一級和二級生物安全水平的操作時(shí)，可穿著(zhù)普通實(shí)驗服。手套應套在實(shí)驗服袖口外面。有些操作可能還需要戴口罩和護目鏡。
2.在生物安全柜內，避免使用酒精燈等明火滅菌器。使用明火會(huì )對氣流產(chǎn)生影響，并且在處理?yè)]發(fā)性物品和易燃物品時(shí)，也易造成危險。在對接種環(huán)進(jìn)行滅菌時(shí)，可以使用紅外線(xiàn)電加熱器(見(jiàn)圖1),或者干脆使用一次性塑料接種環(huán)。
3.手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約1min,以便安全柜調整完畢并且讓里面的空氣“掃過(guò)”手和雙臂的表面以后，才可以開(kāi)始對物品進(jìn)行處理。
4.工作時(shí)，盡量減少手臂的移動(dòng)，移動(dòng)時(shí)要緩慢，防止干擾柜內氣流。在移動(dòng)雙臂進(jìn)出安全柜時(shí)，需要小心維持前面開(kāi)口處氣流的完整性，雙臂應該與工作區開(kāi)口垂直地緩慢進(jìn)出前面的開(kāi)口。
5.在工作臺面上的實(shí)驗操作應該按照從清潔區到污染區的方向進(jìn)行，所有操作在工作臺面的中后部進(jìn)行。
6.工作時(shí)，耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤(pán)放在安全柜內不能拿出安全柜，否則在使用這些物品時(shí)雙臂就必須頻繁進(jìn)出安全柜，這樣會(huì )干擾安全柜空氣屏障的完整性，從而影響對人員和物品的防護。
7.一旦實(shí)驗過(guò)程中產(chǎn)生溢灑物，用消毒紙巾置于其表面吸附清理。
8.盡量使安全柜處于持續工作狀態(tài)，并對所有物品進(jìn)行表面消毒處理，提供大程度的人員保護。從安全柜內部拿取可能產(chǎn)生污染的物品時(shí)，一定要進(jìn)行表面消毒處理。
(三)使用完畢后的處理
1.系緊用過(guò)的生物廢物袋。
2.對安全柜內壁、后壁、工作臺面和前窗內側進(jìn)行清潔和消毒處理。
3.由于剩余的培養基可能會(huì )使微生物生長(cháng)繁殖，因此在實(shí)驗結束時(shí)，包括儀器設備在內的所有物品都應清除表面污染，并移出安全柜。
4.從安全柜內移出手臂之前，一定要進(jìn)行表面消毒處理，然后垂直于工作區開(kāi)口緩慢地移出。
6.在每次使用后，要清除生物安全柜內表面的污染。工作臺面和內壁要用消毒劑進(jìn)行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里的任何微生物。在每天實(shí)驗結束時(shí)，應擦拭生物安全柜的工作臺面、四周以及玻璃的內外側等部位來(lái)清除表面的污染。在對目標生物體有效時(shí)，可以采用漂白劑溶液或70%酒精來(lái)消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無(wú)菌水再次進(jìn)行擦拭。
7.關(guān)閉前操作窗口并開(kāi)啟紫外燈。
(四)生物安全柜內溢灑的處理
處理溢灑物時(shí)不要將頭伸入安全柜內，也不要將臉直接面對前操作口，而應處于前視面板的后方。選擇消毒滅菌劑時(shí)需要考慮其對生物安全柜的腐蝕性。
如果溢灑的量不足1ml時(shí)，可直接用消毒滅菌劑浸濕的紙巾(或其他材料)擦拭。
如果溢灑量大或容器破損，建議按如下操作：使生物安全柜保持開(kāi)啟狀態(tài)；在溢灑物上覆蓋浸有消毒滅菌劑的吸收材料，作用一定時(shí)間以發(fā)揮消毒滅菌作用，必要時(shí)，用消毒滅菌劑浸泡工作表面以及排水溝和接液槽；在安全柜內對所戴手套消毒滅菌后，脫下手套；如果防護醫物已被污染，脫掉所污染的防護醫物后，用適當的消毒滅菌劑清洗暴露部位；穿好適當的個(gè)體防護醫物裝備，如雙層手套、防護醫物、護目鏡和呼吸保護裝置等；小心將吸收了溢灑物的紙巾(或其他吸收材料)連同溢灑物收集到的收集袋或容器中，并反復用新的紙巾(或其他吸收材料)將剩余物質(zhì)吸凈；破碎的玻璃或其他銳器要用鑷子或鉗子處理；用消毒滅菌劑擦拭或噴灑安全柜內壁、工作表面以及前視窗的內側；作用一定時(shí)間后，用潔凈水擦干凈消毒滅菌劑；如果需要浸泡接液槽，在清理接液槽前要先報告主管人員；可能需要用其他方式消毒滅菌后再進(jìn)行清理。如果溢灑物流入生物安全柜內部，需要評估后采取適用的措施。
(五)定期維護
1.每三個(gè)月更換一次預過(guò)濾器。
2.每年更換一次紫外燈。
3.有下列情況之一時(shí)，應對生物安全柜進(jìn)行現場(chǎng)檢測：生物安全實(shí)驗室竣工后，投入使用前，生物安全柜已安裝完畢；生物安全柜被移動(dòng)位置后；對生物安全柜進(jìn)行檢修后；生物安全柜更換高效過(guò)濾器后；生物安全柜一年一度的常規檢測?，F場(chǎng)檢測應由有資質(zhì)的專(zhuān)業(yè)人員按照生產(chǎn)商的說(shuō)明對每一臺生物安全柜的運行性能以及完整性進(jìn)行評估，以檢查其是否符合國家標準要求。安全柜防護醫物衣物效果的評估應該包括對安全柜的完整性、HEPA過(guò)濾器的泄漏、垂直氣流的速度、工作窗口氣流流向和平均風(fēng)速、負壓/換氣次數、氣流的煙霧模式以及警報和互鎖系統進(jìn)行測試。還可以選擇進(jìn)行漏電、光照度、紫外強度、噪音水平以及振動(dòng)性測試。在進(jìn)行這些測試時(shí)，檢測人員要經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)的培訓，采用專(zhuān)門(mén)的技術(shù)和儀器設備。強烈建議由有資質(zhì)的專(zhuān)業(yè)人員來(lái)進(jìn)行測試。
每周采用空氣落菌數相似的方法進(jìn)行無(wú)菌檢查。
生物安全柜在移動(dòng)以及更換過(guò)濾器之前，必須清除污染。常用的方法是采用甲醛熏蒸,應該由有資質(zhì)的專(zhuān)業(yè)人員來(lái)清除污染。
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